T.P : Photosynthèse


I. Mécanisme de la photosynthèse


La photosynthèse s’effectue dans les chloroplastes.



Ils sont composé de 3 membranes distinctes :
Cette dernière est continue et elle se plisse en formant des empilements appelés grana. L’espace intrathylacoide ( lumière ) joue un rôle fondamental dans la transduction de l’énergie lumineuse en énergie chimique. C’est dans la membrane thylacoide que se trouvent les photosystèmes.




La photosynthèse de divisent en 2 phases : Les photosystèmes II et I sont reliés par des transporteurs mobiles d’électrons : Plastoquinone et Plastocyanine. L’eau est utilisée comme source d’électrons et son oxydation en O2 + 2H+ va contribuer à la création de force proton motrice.

2 H2O + 4 hv ---> O2 + 4 H+ + 4 e-

Nous pourrons visualiser l’activité synthétique par la mesure du dégagement de O2.

II. Obtention des thylacoides

Afin de récupérer les thylacoides nous avons broyé des feuilles de salade et on les a soumis à une première centrifugation. Ensuite on a fait un choc hypotonique afin de faire éclater la paroi pectocellulosique, puis on a éliminé par centrifugation dans le tampon C tous les organites autre que les thylacoides. Il est important durant toute la manipulation de conserver les échantillons dans la glace pour éviter l’action des protéases.

III. Spectroscopie

A la fin de la réaction précédente nous obtenons un culot que l’on reprend dans 3 ml de milieu C, ceci constitue notre suspension thylacoide. Parallèlement on a pris une cuve de 3 ml de milieu C et on a ajouter 50µl de notre suspension, pour avoir une D.O à 670nm. On a enregistré un spectre entre 400nm et 700nm.



Puis on a repris 100µl de notre suspension que l 'on a ajouté à 10ml d’un rechange acétone/eau ; on a filtré le tout et récupérée 3 ml pour faire la mesure. On a filtre le tout et récupère 3ml pour faire la mesure. On a fait un spectre entre 400nm et 800nm.



Longueur d’onde ( Lamba en nm ) Absorbance
652 0.125
663 0.233
645 0.078


  • [chl] = DO652 / 36
[chl] = 0.125 / 36 = 3.47 10-3
Le facteur de dilution est de 100, donc on a 0.347 mg/ml dans la solution initiale.
  • [chl a] = 0.0127 DO663 – 0.00269 DO645
[chl a] = 0.0127 x 0.233 – 0.00269 x 0.078 = 2.7 -3
Le facteur de dilution est de 100, donc on a 0.27 mg/ml dans la solution initiale.
  • [chl b] = 0.0229 DO645 – 0.00468 DO663
[chl b] = 0.0229 x 0.078 – 0.00468 x 0.233 = 6.95 10-4
Le facteur de dilution est de 100, donc on a 0.069 mg/ml dans la solution initiale.

[chl a] + [chl b] = [chl]
0.27 + 0.069 = 0.347

Dans l’électrode de Clark le volume total est de 2 ml, il faut que notre concentration de chlorophylle soit de 0.15 mg / ml On fait donc :

Ci . Vi = Cf . Vf

0.347 . 10-3 x Vi = 0.15 x 2 . 10-3
Vi = (0.15/0.347. 10-3) x 2 . 10-3 = 0.864 ml

Je prendrai donc 864 µl de ma solution initiale.

Pour l’étalon :

10 mV --> 1 cm
On a 8.72 mg d’O2 / L à 22° C
On a 15.6 cm de haut. Donc 156 mV pour 8.72 mg / L
Soit 8.72 / 32 = 0.272 micromol / ml

Pour 1 mV on aura : 0.272/156 = 1.743. 10-3 µmol / ml / mV

Pour DCBQ + Ferricyanure ( le résultat le plus proche de la réalité ) :

1 cm --> 2.5 mV
10 cm --> 25 mV

25 mV x 1.74 . 10-3 = 0.0435 µmol / ml [O2]
En horizontal :
12 cm --> 1 minute
10.2 cm --> 0.85 minute
Donc 0.0435 / 0.85 = 0.051 µmol / ml [O2] / min

On la veut par mg de [chl], donc :

0.051 / 0.15 = 0.341 µmol / min [O2] / mg [chl]

On fait pareil pour les autres et on obtient le tableau ci après :

Conditions Activité
( micromol / min [O2] / mg [chl] )
Avec Ferricyanure 0.67
Avec DCBQ 0.13
Avec Ferricyanure + DCBQ 0.34
Avec Ferricyanure + DCBQ + DCMU 0.15



Haut de page

R.SAINZ © 2004